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技術(shù)知識(shí)

色譜柱清洗的基本原則和使用注意事項(xiàng)

發(fā)布時(shí)間: 2021-12-09 21:46   5950 次瀏覽
及時(shí)使用強(qiáng)流動(dòng)相清洗色譜柱,特別是使用等度分析方法或者洗脫強(qiáng)度比較低的分析方法時(shí),很容易積累強(qiáng)保留的化合物。
a.對(duì)于反相模式(如使用C18柱):
1).用高比例水相(如80%)沖洗色譜柱5-10個(gè)柱體積,以去除管路和色譜柱中的緩沖鹽(如果體系沒有使用緩沖鹽可以省略這一步);
2).用高比例有機(jī)相(如80-90甲醇/乙腈等)沖洗色譜柱10-20個(gè)柱體積,必要的時(shí)候,可以使用更強(qiáng)的溶劑(如異丙醇或者含少量THF的異丙醇)清洗,再用推薦保存的流動(dòng)相沖洗后保存。

b. 對(duì)于HILIC模式(如使用Diol柱):
1).用高比例水相(如50%的水,部分HILIC柱有水相比例的******限度,需要仔細(xì)閱讀官方說明書)沖洗色譜柱10-20個(gè)柱體積,以去除管路和色譜柱中的緩沖鹽,并清洗色譜柱;
2) .按照推薦保存的流動(dòng)相沖洗后保存。

Comix系列混合模式色譜柱:
對(duì)于含有強(qiáng)堿性基團(tuán)的固定相,如:



必須需要在弱酸性條件下使用和保存,因?yàn)閺?qiáng)堿性基團(tuán)會(huì)在硅膠表面形成強(qiáng)堿性環(huán)境而破壞硅膠基質(zhì)。
對(duì)于含有酸性基團(tuán)的固定相,如:


不可使用甲醇作為有機(jī)相,因?yàn)樗嵝曰鶊F(tuán)與甲醇發(fā)生酯化反應(yīng)而被改性(稀釋劑中的少量甲醇影響可以忽略),特別要注意避免管路殘留的甲醇被沖洗進(jìn)色譜柱。
氨基柱:
1. 水相高的時(shí)候易發(fā)生固定相(氨丙基)水解而發(fā)生柱流失;
2. 氨基身會(huì)電離而產(chǎn)生強(qiáng)堿性環(huán)境而腐蝕硅膠,因此在弱酸性條件下穩(wěn)定性更好;
3. 易與醛類化合物(如還原性糖:葡萄糖等) 、芳香羰基化合物發(fā)生席夫堿反應(yīng),而死吸附化合物并改性色譜柱,影響重現(xiàn)性:
4. 盡量保存在純有機(jī)相中,以避免發(fā)生水解反應(yīng)和自身電離產(chǎn)生強(qiáng)堿性條件而腐蝕硅膠。

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